如何解決 ELISA 結果中的高背景噪音

<p>&nbsp;<span style="font-size: 12px;"> &nbsp; &nbsp;ELISA實驗高背景噪音會導致假陽性結果，了解高背景的因素至關重要。本文從樣品質量、包被緩沖液、阻斷緩沖液、洗滌緩沖液、檢測系統和數據分析帶大家了解ELISA實驗產生高背景的因素。了解這些因素可以避免后期實驗出現假陽性，影響實驗成本及時間。</span></p> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; </span><strong><span style="font-size: 12px;">樣品質量</span></strong></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; ELISA中高背景噪音的主要來源之一是樣品質量。內毒素、去垢劑或蛋白質等污染物會干擾抗體或酶底物的結合，并產生假陽性信號。為避免這種情況，應使用清潔無菌的設備和試劑，妥善儲存和處理樣品，并避免反復凍融。您還應適當稀釋樣品，以避免飽和或干擾效應。</span></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; </span><strong><span style="font-size: 12px;">包被緩沖液</span></strong></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; 另一個可能影響ELISA背景噪音的因素是用于將捕獲抗體或抗原附著到微孔板孔中的包被緩沖液。包被緩沖液應具有最佳的pH值和離子強度，以確保包被的穩定性和特異性。常見的包被緩沖液是碳酸鹽-碳酸氫鹽緩沖液，其pH值為9.6，適用于大多數蛋白質。然而，某些蛋白質可能需要不同的緩沖液，例如PBS（磷酸鹽緩沖液）或MES（2-(N-嗎啉基)乙磺酸），以避免變性或聚集。還應避免在包被緩沖液中添加疊氮化鈉或其他防腐劑，因為它們會抑制酶活性。</span></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; </span><strong><span style="font-size: 12px;">阻斷緩沖液</span></strong></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; 封閉緩沖液用于在包被步驟后封閉微孔板孔上的非特異性結合位點。封閉緩沖液應與包被緩沖液和檢測系統兼容，并且不應含有任何可能與抗體或酶底物發生反應的成分。常見的封閉緩沖液是BSA（牛血清白蛋白），其濃度可在PBS或TBS（Tris緩沖液）中使用，濃度為1-5%。然而，某些抗體或抗原可能需要不同的封閉劑，例如酪蛋白、明膠或奶粉，以降低交叉反應性或提高信噪比。您還應將封閉緩沖液孵育足夠時間和溫度，以確保完全覆蓋孔板。</span></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp;</span><strong><span style="font-size: 12px;"> 洗滌緩沖液</span></strong></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; 每次孵育步驟后，使用洗滌緩沖液去除微孔板孔中未結合或過量的試劑。洗滌緩沖液應與包被緩沖液和檢測系統兼容，且不應含有任何可能影響結合或酶活性的成分。常用的洗滌緩沖液是含0.05-0.1%Tween20的PBS或TBS，它們可以降低表面張力并提高洗滌效率。然而，某些抗體或抗原可能需要不同的洗滌緩沖液，例如PBST（含0.1%TritonX-100的PBS）或TBST（含0.1%TritonX-100的TBS），以提高溶解度或特異性。您還應使用足夠的體積和循環徹底、持續地清洗孔板，以避免任何殘留試劑。</span></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; </span><strong><span style="font-size: 12px;">檢測系統</span></strong></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; 檢測系統用于測量微孔板孔中結合分析物產生的信號。檢測系統可以是比色法、化學發光法或熒光法，具體取決于所用的酶和底物。檢測系統應針對檢測的靈敏度和動態范圍進行優化，并且在沒有分析物的情況下不應產生任何背景信號。為此，您應該使用高質量且特異性的抗體，選擇合適的酶和底物，嚴格按照孵育時間和溫度的說明書。避免暴露在光線或空氣中，因為它們會降低底物或信號。</span></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; </span><strong><span style="font-size: 12px;">&nbsp; 數據分析</span></strong></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; ELISA故障排除的最后一步是數據分析，用于解釋結果并計算分析物的濃度。數據分析應使用合適的軟件或方法（例如標準曲線或回歸模型）進行，并應考慮任何異常值或誤差。您還應使用適當的對照（例如空白、標準品和樣品）來驗證檢測的準確度和精密度，并校正任何背景噪音。您還應繪制數據圖表，并直觀地檢查信號的分布和變異性。</span></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; 綜合上述介紹，為了避免后期實驗出現背景噪音高，影響實驗成本及時間，結合自身的樣本和實驗要求須嚴格的按照說明書進行。如果你對目前ELISA試劑盒的背景噪音高問題還有疑問，歡迎前來咨詢了解。</span></div>