檢測原理 :

本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。在預包被 豬E選擇素(E-Selectin/CD62E)止抗體（固相抗體）的微孔酶標板中，加入 豬E選擇素(E-Selectin/CD62E) 校準品和待測樣本，再加入另一株 HRP標記的抗 豬E選擇素(E-Selectin/CD62E) （酶標抗體），經過溫育與充分洗滌，去除未結合的組分，在微孔板固相表面形成固相抗體 -抗原-酶標抗體的夾心復合物。加底物 A和 B，底物在 HRP催化下，產生藍色產物，在終止液（2M 硫酸）作用下，最終轉化為黃色，在酶標儀 450nm波長上測定吸光度（OD值），吸光度（OD值）與待測樣品中 豬E選擇素(E-Selectin/CD62E)的濃度正相關。擬合校準品曲線，可以計算出樣本中 豬ELISA試劑盒E-Selectin/CD62E的濃度。

所需器材和試劑

1、 酶標儀 (波長 450nm 濾光片)

2、37°C 恒溫箱(不推薦使用細胞用 CO2 培養箱)

3、 自動洗板機或多道移液器 /5ml 滴管(手工洗板用)

4、 無菌的 EP 管及一次性吸頭

5、 精密的單道 (0.5-10μL, 5-50μL, 20-200μL, 200-1000μL)和多通道移液器(移液器使用前需校準)。

6、吸水紙及加樣槽

7、去離子水或蒸餾水

試劑盒組成：

標本收集 :

1、收集血液的試管應為一次性的無熱原，無內毒素試管。

2、 血漿抗凝劑推薦使用 EDTA 。避免使用溶血，高血脂標本。

3、標本應清澈透明，懸浮物應離心去除。

4、 標本收集后若不及時檢測，請按一次使用量分裝，凍存于 -20 ℃ , -70 ℃電冰箱內，避免反復凍融，3-6月內檢測。

5、 如果您的樣本中檢測物濃度高于標準品最高值，請根據實際情況， 做適當倍數稀釋 (建議做預實驗，以確定稀釋倍數)。

儲存條件：

樣品采集及保存：

1、 血清全血樣本室溫放置 2小時或 2-8°C 過夜。1000×g 離心20分鐘，取上清。可立即檢測，或按一次使用量分裝凍存于-20°C 或-80°C。

2、 血漿抗凝劑推薦使用 EDTA-Na2/K2，樣品采集后30分鐘內于2-8°C，1000×g 離心15分鐘，取上清。可立即檢測，或按一次使用量分裝凍存于-20°C 或-80°C。其他抗凝劑的使用及選擇請查看樣品制備指南。

3、組織樣本組織樣本一般制成組織勻漿，處理方法如下：
3.1、 將目標組織置于冰上，用預冷的 PBS緩沖液(0.01M，pH=7.4)洗滌去除殘留的血液，稱重后備用。

3.2、 在冰上用裂解液研磨組織勻漿。加入裂解液的體積取決于組織的重量，一般情況每 1g 組織碎片使用9ml裂解液。另外建議在裂解液中加入蛋白酶抑制劑，如 1mM PMSF。

3.3、 可再利用超聲破碎或反復凍融進一步處理 (超聲破碎過程中，需冰浴降溫；反復凍融法可重復2次)。

3.4、 將制備好的勻漿液于 5000×g 離心 5 分鐘，留取上清即可檢測。或按一次使用量分裝凍存于-20°C 或-80°C。

3.5、 根據實驗需要，組織勻漿樣本可先測定總蛋白濃度 ,以便于數據分析，推薦 BCA 法。一般調整總蛋白濃度至 1-3mg/ml 用于 ELISA 檢測。某些組織樣本，如肝臟，腎臟，胰腺因含有較高濃度的內源性過氧物酶, 在樣品濃度較高的情況下會和顯色底物反應，出現假陽性。可嘗試使用 1%H2O2 滅活 15min 再檢測。

注意： 裂解液常用 PBS 緩沖液，或使用中等強度 RIPA 裂解液。使用 時，PH 值需調整為PH7.3，避免使用含 NP-40，Triton X-100 和 DTT 的組分，會嚴重抑制試劑盒工作。推薦使用50mM Tris+0.9%NaCL+0.1% SDS,PH 7.3，可自行配制或聯系我們購買。

4、 細胞培養上清收集上清液， 2-8°C，2500rpm 離心 5min，收集澄清的細胞培養上清。立即用于檢測，或按一次使用量分裝于-80°C 凍存備用。

5、細胞裂解液

5.1、 懸浮細胞的收集及裂解： 2-8°C，2500rpm 離心 5min，收集細胞。再加入預冷的 PBS 輕輕混勻清洗，2-8°C，2500rpm 離心 5min，收集細胞。加入 0.5-1ml 細胞裂解液及適量蛋白酶抑制劑(如 PMSF，工作濃度 1mmol/L)，置于冰上，裂解 30min-1h , 或者配合超聲波破碎。

5.2、 貼壁細胞的收集及裂解：吸走上清液，加入預冷的 PBS 洗三次。加入 0.5-1ml 細胞裂解液及適量蛋白酶抑制劑(如PMSF，工作濃度 1mmol/L)，用細胞刮輕輕刮下貼壁細胞。細胞懸液轉入離心管中，置于冰上，裂解 30min-1h，或者配合超聲波破碎。

5.3、 細胞裂解過程中可用槍頭吹打或間斷搖動離心管，使蛋白充分裂解 , 出現黏糊狀是 DNA，可以使用超聲波破碎DNA。(或用超聲波 3-5mm 探頭，功率 150-300W, 冰上超聲處理樣品，工作 1-2 秒，停止 30 秒， 3~5 個循環。)

5.4、 裂解或超聲破碎完成， 2-8°C，10000rpm 離心 10min，上清移入 EP 管中，立即用于檢測，或按一次使用量分裝于-80°C 凍存備用。

注意：注意事項同組織樣本。

6、 其他生物樣本 2-8°C，1000×g 離心樣品 20 分鐘。收集上清液立即用于檢測，或按 一次使用量分裝于-80°C 凍存備用。

操作步驟：

步驟 1： 向孔中加入 100ul 標準品或待測樣品，貼上覆膜， 37°C 靜置孵育 90 分鐘。

洗板： 洗板 2 次。不浸泡。

步驟 2： 加入 100ul 生物素-抗體工作液，貼上覆膜， 37°C 靜置孵育 60 分鐘。

洗板： 洗板 3 次。每次浸泡 1 分鐘。

步驟 3： 加入 100ul HRP-鏈霉親和素(SABC)工作液，貼上覆膜，37°C 靜置孵育 30 分鐘。

洗板： 洗板 5 次。每次浸泡 1 分鐘。

步驟 4： 添加 90ul TMB 顯色底物。貼上覆膜， 37°C 靜置孵育 10-20 分鐘(請使用 TMB 顯色精準控制方法)。

步驟 5： 添加 50ul 反應終止液。立即在 450nm 處讀取 OD450 值并計算。

注意事項：

1、使用不同的試劑盒時，需先做好標記，防止組分混用，導致實驗失敗。

2、 試劑盒開啟后，酶標板和標準品的保存條件請參考組件保存條件表格 (受潮后活性會下降)。如發生使用或保存不當 導致組件缺損，可申請購買配套組件 (如 E002 凍干標準品)。

3、請使用無菌一次性吸頭吸取試劑，使用后，須旋緊試劑瓶蓋，以防止微生物污染和蒸發。

4、手工洗板時，加洗液的吸頭或滴管，切勿接觸酶標板孔。不充分的洗滌或污染容易造成假陽性和高背景。

5、檢測過程中，請提前準備好下一步實驗所需試劑，洗板后及時將試劑加入板孔，防止板孔干燥，導致檢測失效。

6、在未經確認的情況下，請勿將其他批次試劑盒的試劑或其他來源的試劑用于本試劑盒。

7、請勿重復使用一次性吸頭，以免造成交叉污染。

8、加樣完成，貼覆膜以防孵育過程樣品的蒸發，在推薦溫度下完成孵育過程。

9、試驗中請穿實驗服、戴口罩、手套等，做好防護工作。特別是檢測血液或者其他體液樣品時，請按生物試驗室安全防護條例執行。

總結：感謝您選用本公司ELISA系列產品。本產品可檢測血清、血漿、細胞培養上清液、灌洗液、尿液、羊水、腹水、腦脊液、胸腔積液、組織勻漿液等多種類型樣本豬ELISA試劑盒E-Selectin/CD62E濃度，具體適用樣本請咨詢本商鋪。

• 犬白介素5(IL-5)
• 犬白介素3(IL-3)
• 犬白介素1β(IL-1β)
• 犬白介素1α(IL-1α)
• 犬白介素17(IL-17)
• 犬白介素13(IL-13)
• 犬白介素12B(IL-12B)
• 牛白介素22(IL-22)
• 牛白介素1α(IL-1α)
• 牛白介素18(IL-18)
• 牛白介素16(IL-16)
• 牛白介素15(IL-15)
• 牛白介素13(IL-13)
• 綿羊白介素8(IL-8)
• 綿羊白介素4(IL-4)
• 綿羊白介素1β(IL1-β)
• 綿羊白介素1α(IL-1α)
• 綿羊白介素17(IL-17)
• 雞熱休克蛋白70(HSP-70)
• 雞免疫球蛋白M(IgM)
• 雞免疫球蛋白G(IgG)
• 雞巨噬細胞炎性蛋白1β(MIP-1β)
• 雞核因子κB(NFkB)
• 雞骨成型蛋白2(BMP-2)
• 雞干擾素β(IFNβ)
• 雞干擾素α(IFN-α)
• 雞白介素1β(IL-1β)
• 猴載脂蛋白α1(αPO-α1)
• 猴免疫球蛋白G Fc片段(Fcγ)
• 猴骨鈣素(OC/BGP)
• 猴干擾素β(IFN-β)
• 猴Ⅰ型膠原交聯羧基端肽(CTXⅠ)
• 小鼠免疫球蛋白α(Igα)
• 抗小鼠Ⅱ型膠原抗體(Col II αb)
• 小鼠CD6分子(CD6)
• 小鼠免疫球蛋白G1 Fc段(IgG1 Fc)
• 小鼠免疫球蛋白G3(IgG3)
• 小鼠免疫球蛋白G2b(IgG2b)
• 小鼠微管蛋白β(TUBb)
• 小鼠糖蛋白激素β5(GPHb5)
• 小鼠膠質細胞系來源神經營養因子(GDNF)
• 小鼠白介素20(IL-20)
• 小鼠白介素31(IL-31)
• 小鼠細胞色素P450 17α1(CYP17α1)
• 小鼠免疫球蛋白G2α(IgG2α)
• 小鼠表面活性物質關聯蛋白C(SP-C)
• 小鼠白介素8受體β(IL8Rb)
• 小鼠白介素10受體α(IL-10Rα)
• 小鼠白介素11受體α(IL-11Rα)
• 小鼠白介素2受體α(IL-2Rα)
• 小鼠再生胰島衍生蛋白3α(REG3α)
• 小鼠Bcl2關聯X蛋白(Bαx)
• 小鼠Mdm2 p53結合蛋白同源物(MDM2)
• 小鼠白介素17F(IL-17F)
• 小鼠骨形態發生蛋白 9(BMP-9)
• 小鼠C-型鈉尿肽(CNP)
• 小鼠骨成型蛋白受體1A(BMPR1A)
• 小鼠次黃嘌呤核苷酸環水解酶(αTIC)
• 小鼠多巴胺受體D2(DRD2)
• 小鼠CXC趨化因子受體5(CXCR5)

酶聯生物經過不斷的實驗優化和改進，積累了大量的經驗，擁有專業的酶聯研發團隊。利用專業的酶聯免疫技術自主研發的elisa試劑盒，能對血清及其它樣本定量檢測抗原，定性檢測特異性抗體。優質的試劑，先進的儀器和正確的操作是保證ELISA檢測結果準確可靠的必要條件。ELISA檢測的方便性、穩定性、重復性和可靠性方面都具有很大的優勢。

ELISA檢測技術服務內容：
1、雙抗體夾心法檢測抗原 2、間接法檢測抗體 3、為客戶提供各種ELISA技術進行樣本檢測。

以上代測費，凡購買本公司試劑盒，我們免費代測！
凡購買本公司目錄任何一種酶聯免疫檢測試劑盒，您只需將需要檢測的動物（Human, Rat, Mouse, Rabbit, Monkey, Pig……）種類和檢測指標（白介素類、激素類）及標本數量（48T/96T）通知公司業務員即可。在接到客戶標本當日起，現貨產品一周內將檢測報告交到客戶手中！
歡迎各科研單位在各種項目上與我們公司開展不同層次的密切合作，以雙贏求發展，共同進步，為中國檢測事業的發展積累經驗。

二、樣本要求
在收集標本前都必須有一個完整的計劃，必須清楚要檢測的成份是否足夠穩定。我們提倡新鮮標本盡早檢測，對收集后當天就進行檢測的標本，及時儲存在4℃備用，如有特殊原因需要周期收集標本，請造模取材后，將標本及時分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存。因冰室與室溫存在一定溫差，蛋白極易降解，直接影響實驗質量，所以避免反復凍融。代測放免標本的客戶取材前須向我司銷售人員索要說明書，具體操作注意事項請與我司技術人員溝通。

液體類標本：標本必須為液體，不含沉淀。包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養上清、組織勻漿等。

血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。收集上清。如有沉淀形成，應再次離心。

血漿：應根據試劑盒的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，加入10%（v/v）抗凝劑(0.1M檸檬酸鈉或1%heparin 或2.0%EDTA.Na2)混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。如有沉淀形成，應再次離心。

尿液、胸腹水、腦脊液：用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。如有沉淀形成，應再次離心。

細胞培養上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時，用PBS（PH7.0-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。

組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，緩沖液中可加入1μg/L蛋白酶抑制劑或50U/ml的Aprotinin（抑肽酶）。用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清置于-20度或-70度保存，如有必要，可以將樣品濃縮干燥。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

三、寄標本時需注明以下情況：
1、標本編號；2、所測項目；3、是否做復孔；3、聯系方式；4、實驗后標本是否寄回。

客戶須知：
客戶應對所提供的材料及信息負責，如因客戶提供的材料及信息不準確而引起的實驗延誤或經濟損失由客戶承擔。